WS310.3-2016 word版 醫院消毒供應中心 第三部分:清洗消毒及滅菌效果監測標準
Central sterile supply department (CSSD)-Part 3：Surveillance standard for cleaning,disinfection and sterilization
WS310.3—2016
代替WS310.3—2009
2016-12-27 發(fā)布 2017-6-01實(shí)施
中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會(huì )
前言
本部分4.2.1.3、4.2.2.2.1、4.4.1.7、4.4.4.3.2為推薦性條款，其余均為強制性條款。
根據《中華人民共和國傳染病防治法》和《醫院感染管理辦法》制定本標準。
WS310《醫院消毒供應中心》是從診療器械相關(guān)醫院感染預防與控制的角度，對醫院消毒供應中心 的管理、操作、監測予以規范的標準，由以下三個(gè)部分組成：
——第1部分:管理規范；
——第2部分:清洗消毒及滅菌技術(shù)操作規范；
——第3部分:清洗消毒及滅菌效果監測標準。
本部分為WS310的第3部分。
本部分按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。
本部分代替WS 310.3—2009。除編輯性修改外主要技術(shù)變化如下：
——在適用范圍中，刪除了“暫未實(shí)行消毒供應工作集中管理的醫院，其手術(shù)部（室）的消毒供應工 作應執行本標準”和“已采取污水集中處理的其他醫療機構可參照使用”的要求；
——在規范性引用文件中，增加了 WS/T 367《醫療機構消毒技術(shù)規范》和GB/T 30690《小型壓力 蒸汽滅菌器滅菌效果監測方法和評價(jià)要求》；
——調整術(shù)語(yǔ)和定義中的A。值和管腔器械至WS310.2;增加大修的定義（見(jiàn)3.4);
——修改了監測材料、自制測試標準包的要求(見(jiàn)4.1.3);
——增加了對壓力蒸汽滅菌器溫度、壓力和時(shí)間的檢測要求[見(jiàn)4.1.5.b)];
——增加了對清洗質(zhì)量可定期進(jìn)行定量檢測的要求(見(jiàn)4.2.1.3);
——增加了使用特定滅菌程序時(shí)對滅菌質(zhì)量監測的要求（見(jiàn)4.4.1.6);增加了外來(lái)醫療器械、植人 物、硬質(zhì)容器、超大超重包首次滅菌進(jìn)行滅菌參數和有效性測試的要求(見(jiàn)4.4.1.8);
——增加了對壓力蒸汽滅菌每年監測溫度、壓力和時(shí)間等參數的要求（見(jiàn)4.4.2.1.2);
——增加了對采用信息系統手術(shù)器械包用后有關(guān)標識的要求[見(jiàn)5.4.C)];增加了定期對監測資料 進(jìn)行總結分析，持續改進(jìn)的要求(見(jiàn)5.6);
——增加了附錄D過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌的生物監測方法和附錄E低溫蒸汽甲醛滅菌的生物 監測方法。
本部分主要起草單位:北京大學(xué)第一醫院、國家衛生計生委醫院管理研究所、北京協(xié)和醫院、中國疾病預防控制中心環(huán)境與健康產(chǎn)品安全所、上海瑞金醫院、廣州市第一人民醫院、江蘇省南京市衛生局、浙 江省疾病預防控制中心、解放軍總醫院、四川大學(xué)華西醫院、浙江大學(xué)邵逸夫醫院、北京大學(xué)第三醫院、 北京大學(xué)口腔醫院、泰達國際心血管病醫院、廣東省中山市小欖人民醫院、黑龍江疾病預防控制中心、北 京積水潭醫院、北京市衛生監督所、北京朝陽(yáng)醫院。
本部分主要起草人:李六億、鞏玉秀、付強、任伍愛(ài)、張青、張流波、李新武、錢(qián)黎明、馮秀蘭、王易非、 張宇、周彬、么莉、黃靖雄、胡國慶、劉運喜、黃浩、王亞娟、袁曉寧、劉翠梅、趙云呈、姜華、林玲、陳輝、 裴紅生、李保華。
本部分所代替標準歷次版本發(fā)布情況為：
--- WS 310.3—2009。
1范圍
WS310的本部分規定了醫院消毒供應中心（central sterilesupplydepartment，CSSD)消毒與滅菌 效果監測的要求、方法、質(zhì)量控制過(guò)程的記錄與可追溯要求。
本部分適用于醫院和為醫院提供消毒滅菌服務(wù)的消毒服務(wù)機構。
2規范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB 15982 醫院消毒衛生標準
GB/T 20367醫療保健產(chǎn)品滅菌醫療保健機構濕熱滅菌的確認和常規控制要求
GB/T 30690小型壓力蒸汽滅菌器滅菌效果監測方法和評價(jià)要求
WS310.1醫院消毒供應中心第1部分:管理規范
WS310.2醫院消毒供應中心第2部分:清洗消毒及滅菌技術(shù)操作規范
WS/T 367醫療機構消毒技術(shù)規范
3術(shù)語(yǔ)和定義
WS310.1、WS310.2界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。
3 .1
對影響滅菌過(guò)程和結果的關(guān)鍵要素進(jìn)行記錄，保存備查，實(shí)現可追蹤。
3 .2
滅菌過(guò)程驗證裝置 process challenge device;PCD
對滅菌過(guò)程具有特定抗力的裝置，用于評價(jià)滅菌過(guò)程的有效性。
3 .3
清洗效果測試物
用于測試清洗效果的產(chǎn)品。
3.4
大修
超出該設備常規維護保養范圍，顯著(zhù)影響該設備性能的維修操作。
示例1:壓力蒸汽滅菌器大修如更換真空泵、與腔體相連的閥門(mén)、大型供汽管道、控制系統等。 示例2:清洗消毒器大修如更換水泵、清洗劑供給系統、加熱系統、控制系統等。
3.5
小型蒸汽滅菌器 small steamsterilizer
體積小于60L的壓力蒸汽滅菌器。
3.6
專(zhuān)門(mén)用于處理立即使用物品的壓力蒸汽滅菌過(guò)程。
4.1.1應專(zhuān)人負責質(zhì)量監測工作。
4.1.2應定期對醫用清洗劑、消毒劑、清洗用水、醫用潤滑劑、包裝材料等進(jìn)行質(zhì)量檢查，檢查結果應符 合WS310.1的要求。
4.1.3應進(jìn)行監測材料衛生安全評價(jià)報告及有效期等的檢查，檢查結果應符合要求。自制測試標準包 應符合WS/T 367的有關(guān)要求。
4.1.4應遵循設備生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊對清洗消毒器、封口機、滅菌器定期進(jìn)行預防性維 護與保養、日常清潔和檢查。
4.1.5應按照以下要求進(jìn)行設備的檢測：
a) 清洗消毒器應遵循生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊進(jìn)行檢測；
b) 壓力蒸汽滅菌器應每年對滅菌程序的溫度、壓力和時(shí)間進(jìn)行檢測；
c) 壓力蒸汽滅菌器應定期對壓力表和安全閥進(jìn)行檢測；
d) 干熱滅菌器應每年用多點(diǎn)溫度檢測儀對滅菌器各層內、中、外各點(diǎn)的溫度進(jìn)行檢測；
e) 低溫滅菌器應每年定期遵循生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊進(jìn)行檢測；
f) 封口機應每年定期遵循生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊進(jìn)行檢測。
在檢查包裝時(shí)進(jìn)行，應目測和（或）借助帶光源放大鏡檢查。清洗后的器械表面及其關(guān)節、齒牙應光 潔，無(wú)血漬、污漬、水垢等殘留物質(zhì)和銹斑。
每月應至少隨機抽查3個(gè)?5個(gè)待滅菌包內全部物品的清洗質(zhì)量，檢查的內容同日常監測，并記錄 監測結果。
可定期采用定量檢測的方法，對診療器械、器具和物品的清洗效果進(jìn)行評價(jià)。
4.2.2清洗消毒器及其質(zhì)量的監測 4.2.2.1日常監測
應每批次監測清洗消毒器的物理參數及運轉情況，并記錄。
4.2.2.2 定期監測
4.2.2.2.1對清洗消毒器的清洗效果可每年采用清洗效果測試物進(jìn)行監測。當清洗物品或清洗程序發(fā)生改變時(shí)，也可采用清洗效果測試指示物進(jìn)行清洗效果的監測。
4.2.2.22清洗效果測試物的監測方法應遵循生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊。
4.22.3注意事項
清洗消毒器新安裝、更新、大修、更換清洗劑、改變消毒參數或裝載方法等時(shí)，應遵循生產(chǎn)廠(chǎng)家的使 用說(shuō)明或指導手冊進(jìn)行檢測，清洗消毒質(zhì)量檢測合格后，清洗消毒器方可使用。
4.3消毒質(zhì)量的監測
4.3.1濕熱消毒
應監測、記錄每次消毒的溫度與時(shí)間或A。值。監測結果應符合WS310.2的要求。應每年檢測清 洗消毒器的溫度、時(shí)間等主要性能參數。結果應符合生產(chǎn)廠(chǎng)家的使用說(shuō)明或指導手冊的要求。
4.3.2化學(xué)消毒
應根據消毒劑的種類(lèi)特點(diǎn)，定期監測消毒劑的濃度、消毒時(shí)間和消毒時(shí)的溫度，并記錄，結果應符合 該消毒劑的規定。
4.3.3消毒效果監測
消毒后直接使用物品應每季度進(jìn)行監測，監測方法及監測結果應符合GB 15982的要求。每次檢 測3件?5件有代表性的物品。
4.4滅菌質(zhì)量的監測
4.4.1原則
4.4.1.1對滅菌質(zhì)量采用物理監測法、化學(xué)監測法和生物監測法進(jìn)行，監測結果應符合本標準的要求。 4.4.1.2物理監測不合格的滅菌物品不得發(fā)放，并應分析原因進(jìn)行改進(jìn)，直至監測結果符合要求。
4.4.1.3包外化學(xué)監測不合格的滅菌物品不得發(fā)放，包內化學(xué)監測不合格的滅菌物品和濕包不得使用。 并應分析原因進(jìn)行改進(jìn)，直至監測結果符合要求。
4.4.1.4生物監測不合格時(shí)，應盡快召回上次生物監測合格以來(lái)所有尚未使用的滅菌物品，重新處理; 并應分析不合格的原因，改進(jìn)后，生物監測連續三次合格后方可使用。
4.4.1.5植人物的滅菌應每批次進(jìn)行生物監測。生物監測合格后，方可發(fā)放。
4.4.16使用特定的滅菌程序滅菌時(shí)，應使用相應的指示物進(jìn)行監測。
4.4.1.7按照滅菌裝載物品的種類(lèi)，可選擇具有代表性的PCD進(jìn)行滅菌效果的監測。
4.4.1.8滅菌外來(lái)醫療器械、植人物、硬質(zhì)容器、超大超重包，應遵循廠(chǎng)家提供的滅菌參數，首次滅菌時(shí) 對滅菌參數和有效性進(jìn)行測試，并進(jìn)行濕包檢查。
4.4.2壓力蒸汽滅菌的監測
4.4.2.1物理監測法
4.4.2.1.1日常監測：每次滅菌應連續監測并記錄滅菌時(shí)的溫度、壓力和時(shí)間等滅菌參數。滅菌溫度波 動(dòng)范圍在+ 3°C內，時(shí)間滿(mǎn)足最低滅菌時(shí)間的要求，同時(shí)應記錄所有臨界點(diǎn)的時(shí)間、溫度與壓力值，結果 應符合滅菌的要求。
4.4.2.1.2定期監測：應每年用溫度壓力檢測儀監測溫度、壓力和時(shí)間等參數，檢測儀探頭放置于最難 滅菌部位。
4.4.2.2化學(xué)監測法
4.4.2.2.1應進(jìn)行包外、包內化學(xué)指示物監測。具體要求為滅菌包包外應有化學(xué)指示物，高度危險性物 品包內應放置包內化學(xué)指示物，置于最難滅菌的部位。如果透過(guò)包裝材料可直接觀(guān)察包內化學(xué)指示物 的顏色變化，則不必放置包外化學(xué)指示物。根據化學(xué)指示物顏色或形態(tài)等變化，判定是否達到滅菌合格
要求。
4.4.2.2.2采用快速程序滅菌時(shí)，也應進(jìn)行化學(xué)監測。直接將一片包內化學(xué)指示物置于待滅菌物品旁 邊進(jìn)行化學(xué)監測。
4.4.2.3生物監測法
4.4.2.3.1應至少每周監測一次，監測方法遵循附錄A的要求。
4.4.2.3.2緊急情況滅菌植人物時(shí)，使用含第5類(lèi)化學(xué)指示物的生物PCD進(jìn)行監測，化學(xué)指示物合格 可提前放行，生物監測的結果應及時(shí)通報使用部門(mén)。
4.4.2.3.3采用新的包裝材料和方法進(jìn)行滅菌時(shí)應進(jìn)行生物監測。
4.4.2.3.4小型壓力蒸汽滅菌器因一般無(wú)標準生物監測包，應選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌物品 制作生物測試包或生物PCD,置于滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應處于滿(mǎn)載狀態(tài)。生物測試包或 生物PCD應側放，體積大時(shí)可平放。
4.4.2.3.5采用快速程序滅菌時(shí)，應直接將一支生物指示物，置于空載的滅菌器內，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后 取出，規定條件下培養，觀(guān)察結果。
4.4.2.36生物監測不合格時(shí)，應遵循4.4.1.4的規定。
4.4.2.4 B-D 試驗
預真空（包括脈動(dòng)真空）壓力蒸汽滅菌器應每日開(kāi)始滅菌運行前空載進(jìn)行B-D測試，B-D測試合格 后，滅菌器方可使用。B-D測試失敗，應及時(shí)查找原因進(jìn)行改進(jìn)，監測合格后，滅菌器方可使用。小型壓 力蒸汽滅菌器的B-D試驗應參照GB/T 30690。
4.4.25滅菌器新安裝、移位和大修后的監測
應進(jìn)行物理監測、化學(xué)監測和生物監測。物理監測、化學(xué)監測通過(guò)后，生物監測應空載連續監測三 次，合格后滅菌器方可使用，監測方法應符合GB/T 20367的有關(guān)要求。對于小型壓力蒸汽滅菌器，生 物監測應滿(mǎn)載連續監測三次，合格后滅菌器方可使用。預真空（包括脈動(dòng)真空）壓力蒸汽滅菌器應進(jìn)行 B-D測試并重復三次，連續監測合格后，滅菌器方可使用。
4.4.3 干熱滅菌的監測
4.4.3.1物理監測法：每滅菌批次應進(jìn)行物理監測。監測方法包括記錄溫度與持續時(shí)間。溫度在設定 時(shí)間內均達到預置溫度，則物理監測合格。
4.4.3.2化學(xué)監測法：每一滅菌包外應使用包外化學(xué)指示物，每一滅菌包內應使用包內化學(xué)指示物，并 置于最難滅菌的部位。對于未打包的物品，應使用一個(gè)或者多個(gè)包內化學(xué)指示物，放在待滅菌物品附近 進(jìn)行監測。經(jīng)過(guò)一個(gè)滅菌周期后取出，據其顏色或形態(tài)的改變判斷是否達到滅菌要求。
4.4.3.3生物監測法：應每周監測一次，監測方法遵循附錄B的要求。
4.4.3.4新安裝、移位和大修后的監測：應進(jìn)行物理監測法、化學(xué)監測法和生物監測法監測（重復三次），
監測合格后，滅菌器方可使用。
4.4.4低溫滅菌的監測 4.4.4.1 原則
低溫滅菌器新安裝、移位、大修、滅菌失敗、包裝材料或被滅菌物品改變，應對滅菌效果進(jìn)行重新評 價(jià)，包括采用物理監測法、化學(xué)監測法和生物監測法進(jìn)行監測（重復三次），監測合格后，滅菌器方可 使用。
4.4.42環(huán)氧乙烷滅菌的監測
4.4.42.1物理監測法：每次滅菌應監測并記錄滅菌時(shí)的溫度、壓力、時(shí)間和相對濕度等滅菌參數。滅 菌參數應符合滅菌器的使用說(shuō)明或操作手冊的要求。
4.4.42.2化學(xué)監測法：每個(gè)滅菌物品包外應使用包外化學(xué)指示物，作為滅菌過(guò)程的標志，每包內最難 滅菌位置放置包內化學(xué)指示物，通過(guò)觀(guān)察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。
4.4.42.3生物監測法：每滅菌批次應進(jìn)行生物監測，監測方法遵循附錄C的要求。
4.4.4.3過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌的監測
4.4.4.3.1物理監測法：每次滅菌應連續監測并記錄每個(gè)滅菌周期的臨界參數如艙內壓、溫度、等離子 體電源輸出功率和滅菌時(shí)間等滅菌參數。滅菌參數應符合滅菌器的使用說(shuō)明或操作手冊的要求。 4.4.4.32可對過(guò)氧化氫濃度進(jìn)行監測。
4.4.4.3.3化學(xué)監測法：每個(gè)滅菌物品包外應使用包外化學(xué)指示物，作為滅菌過(guò)程的標志；每包內最難 滅菌位置應放置包內化學(xué)指示物，通過(guò)觀(guān)察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。
4.443.4生物監測法：每天使用時(shí)應至少進(jìn)行一次滅菌循環(huán)的生物監測，監測方法遵循附錄D的
要求。
4.4.4.4低溫蒸汽甲醛滅菌的監測
4.4.4.4.1物理監測法：每滅菌批次應進(jìn)行物理監測。詳細記錄滅菌過(guò)程的參數，包括滅菌溫度、相對 濕度、壓力與時(shí)間。滅菌參數應符合滅菌器的使用說(shuō)明或操作手冊的要求。
4.4.4.4.2化學(xué)監測法：每個(gè)滅菌物品包外應使用包外化學(xué)指示物，作為滅菌過(guò)程的標志；每包內最難 滅菌位置應放置包內化學(xué)指示物，通過(guò)觀(guān)察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。
4.4.4.43生物監測法：應每周監測一次，監測方法遵循附錄E的要求。
4.4.4.5其他低溫滅菌方法的監測要求及方法應符合國家有關(guān)標準的規定。
5質(zhì)量控制過(guò)程的記錄與可追溯要求
5.1應建立清洗、消毒、滅菌操作的過(guò)程記錄，內容包括：
a) 應留存清洗消毒器和滅菌器運行參數打印資料或記錄；
b) 應記錄滅菌器每次運行情況，包括滅菌日期、滅菌器編號、批次號、裝載的主要物品、滅菌程序 號、主要運行參數、操作員簽名或代號，及滅菌質(zhì)量的監測結果等，并存檔。
5.2應對清洗、消毒、滅菌質(zhì)量的日常監測和定期監測進(jìn)行記錄。
5.3記錄應具有可追溯性，清洗、消毒監測資料和記錄的保存期應>6個(gè)月，滅菌質(zhì)量監測資料和記錄 的保留期應>3年。
5.4滅菌標識的要求如下：
a) 滅菌包外應有標識，內容包括物品名稱(chēng)、檢查打包者姓名或代號、滅菌器編號、批次號、滅菌曰 期和失效日期；或含有上述內容的信息標識。
b) 使用者應檢查并確認包內化學(xué)指示物是否合格、器械干燥、潔凈等，合格方可使用。同時(shí)將手 術(shù)器械包的包外標識留存或記錄于手術(shù)護理記錄單上。
c) 如采用信息系統，手術(shù)器械包的標識使用后應隨器械回到CSSD進(jìn)行追溯記錄。
5.5應建立持續質(zhì)量改進(jìn)制度及措施，發(fā)現問(wèn)題及時(shí)處理，并應建立滅菌物品召回制度如下：
a) 生物監測不合格時(shí)，應通知使用部門(mén)停止使用，并召回上次監測合格以來(lái)尚未使用的所有滅菌 物品。同時(shí)應書(shū)面報告相關(guān)管理部門(mén)，說(shuō)明召回的原因。
b) 相關(guān)管理部門(mén)應通知使用部門(mén)對已使用該期間無(wú)菌物品的患者進(jìn)行密切觀(guān)察。
c) 應檢查滅菌過(guò)程的各個(gè)環(huán)節，查找滅菌失敗的可能原因，并采取相應的改進(jìn)措施后，重新進(jìn)行 生物監測3次，合格后該滅菌器方可正常使用。
d) 應對該事件的處理情況進(jìn)行總結，并向相關(guān)管理部門(mén)匯報。
5.6應定期對監測資料進(jìn)行總結分析，做到持續質(zhì)量改進(jìn)。
按照WS/T 367的規定，將嗜熱脂肪桿菌芽孢生物指示物置于標準測試包的中心部位，生物指示物 應符合國家相關(guān)管理要求。標準測試包由16條41cmX66cm的全棉手術(shù)巾制成，即每條手術(shù)巾的長(cháng) 邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cmX23cmX15cm、1.5kg的標準測試包。
A.2監測方法
按照WS/T 367的規定，將標準生物測試包或生物PCD(含一次性標準生物測試包），對滿(mǎn)載滅菌 器的滅菌質(zhì)量進(jìn)行生物監測。標準生物監測包或生物PCD置于滅菌器排氣口的上方或生產(chǎn)廠(chǎng)家建議 的滅菌器內最難滅菌的部位，經(jīng)過(guò)一個(gè)滅菌周期后，自含式生物指示物遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行培養；如使 用芽孢菌片，應在無(wú)菌條件下將芽孢菌片接種到含1〇mL溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基的無(wú)菌試管 中，經(jīng)56°C±2°C培養7d，檢測時(shí)以培養基作為陰性對照（自含式生物指示物不用設陰性對照），以加 人芽孢菌片的培養基作為陽(yáng)性對照；見(jiàn)察培養結果。如果一天內進(jìn)行多次生物監測，且生物指示物為同 一批號，則只需設一次陽(yáng)性對照。
A.3結果判定
陽(yáng)性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，試驗組培養陰性，判定為滅菌合格。陽(yáng)性對照組培養 陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，試驗組培養陽(yáng)性，則滅菌不合格；同時(shí)應進(jìn)一步鑒定試驗組陽(yáng)性的細菌是否 為指示菌或是污染所致。
按照WS/T 367的規定，將枯草桿菌黑色變種芽孢菌片裝人無(wú)菌試管內（1片/管），制成標準生物 測試管。生物指示物應符合國家相關(guān)管理要求。
B.2監測方法
將標準生物測試管置于滅菌器與每層門(mén)把手對角線(xiàn)內、外角處，每個(gè)位置放置2個(gè)標準生物測試 管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門(mén)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80 °C左右時(shí)，加蓋試管帽后取出試 管。在無(wú)菌條件下，每管加人5mL胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB)，36°C±1°C培養48h，觀(guān)察初步 結果，無(wú)菌生長(cháng)管繼續培養至第7日。檢測時(shí)以培養基作為陰性對照，以加人芽孢菌片的培養基作為陽(yáng) 性對照。
B.3結果判定
陽(yáng)性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，若每個(gè)測試管的肉湯培養均澄清，判為滅菌合格；若陽(yáng) 性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，而只要有一個(gè)測試管的肉湯培養混濁，判為不合格；對難以判 定的測試管肉湯培養結果，取0.1mL肉湯培養物接種于營(yíng)養瓊脂平板，用滅菌L棒或接種環(huán)涂勻，置 36C±1C培養48h，觀(guān)察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長(cháng)，若有指示菌生長(cháng)，判 為滅菌不合格；若無(wú)指示菌生長(cháng)，判為滅菌合格。
取一個(gè)20mL無(wú)菌注射器，去掉針頭，拔出針栓，將枯草桿菌黑色變種芽孢生物指示物放人針筒 內，帶孔的塑料帽應朝向針頭處，再將注射器的針栓插回針筒（注意不要碰及生物指示物），之后用一條 全棉小毛巾兩層包裹，置于紙塑包裝袋中，封裝。生物指示物應符合國家相關(guān)管理要求。
C.2監測方法
將常規生物測試包置于滅菌器最難滅菌的部位(所有裝載滅菌包的中心部位）。滅菌周期完成后應 立即將生物測試包從被滅菌物品中取出。自含式生物指示物遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行培養；如使用芽孢菌 片的，應在無(wú)菌條件下將芽孢菌片接種到含5mL胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB)的無(wú)菌試管中， 36°C±1°C培養48h，觀(guān)察初步結果，無(wú)菌生長(cháng)管繼續培養至第7日。檢測時(shí)以培養基作為陰性對照 (自含式生物指示物不用設陰性對照），以加人芽孢菌片的培養基作為陽(yáng)性對照。
C.3結果判定
陽(yáng)性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，試驗組培養陰性，判定為滅菌合格。陽(yáng)性對照組培養 陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，試驗組培養陽(yáng)性，則滅菌不合格；同時(shí)應進(jìn)一步鑒定試驗組陽(yáng)性的細菌是否 為指示菌或是污染所致。
采用嗜熱脂肪桿菌芽孢生物指示物制作管腔生物PCD或非管腔生物監測包;生物指示物的載體應 對過(guò)氧化氫無(wú)吸附作用，每一載體上的菌量應達到1X106CFU，所用芽孢對過(guò)氧化氫氣體的抗力應穩 定并鑒定合格;所用產(chǎn)品應符合國家相關(guān)管理要求。
D.2管腔生物PCD的監測方法
滅菌管腔器械時(shí)，可使用管腔生物PCD進(jìn)行監測，應將管腔生物PCD放置于滅菌器內最難滅菌的 部位（按照生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)建議，遠離過(guò)氧化氫注人口，如滅菌艙下層器械擱架的后方）。滅菌周期完成 后立即將管腔生物PCD從滅菌器中取出，生物指示物應放置56 °C±2 °C培養7d(或遵循產(chǎn)品說(shuō)明 書(shū)），觀(guān)察培養結果。并設陽(yáng)性對照和陰性對照（自含式生物指示物不用設陰性對照）。
滅菌非管腔器械時(shí)，應使用非管腔生物監測包進(jìn)行監測，應將生物指示物置于特衛強材料的包裝袋 內，密封式包裝后，放置于滅菌器內最難滅菌的部位（按照生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)建議，遠離過(guò)氧化氫注人口， 如滅菌艙下層器械擱架的后方）。滅菌周期完成后立即將非管腔生物監測包從滅菌器中取出，生物指示 物應放置56C±2C培養7d(或遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)），觀(guān)察培養結果。并設陽(yáng)性對照和陰性對照（自含式 生物指示物不用設陰性對照）。
D.4結果判定
陽(yáng)性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，實(shí)驗組培養陰性，判定為滅菌合格。陽(yáng)性對照組培養 陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，實(shí)驗組培養陽(yáng)性，判定為滅菌失??；同時(shí)應進(jìn)一步鑒定實(shí)驗組陽(yáng)性的細菌是 否為指示菌或是污染所致。
采用嗜熱脂肪桿菌芽孢生物指示物制作管腔生物PCD或非管腔生物監測包;生物指示物的載體應 對甲醛無(wú)吸附作用，每一載體上的菌量應達到1X106CFU，所用芽孢對甲醛的抗力應穩定并鑒定合格， 所用產(chǎn)品應符合國家相關(guān)管理要求。
E.2管腔生物PCD的監測方法
滅菌管腔器械時(shí)，可使用管腔生物PCD進(jìn)行監測，應將管腔生物PCD放置于滅菌器內最難滅菌的 部位（按照生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)建議，遠離甲醛注人口），滅菌周期完成后立即將管腔生物PCD從滅菌器中 取出，生物指示物應放置56°C±2°C培養7d(或遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)），觀(guān)察培養結果。并設陽(yáng)性對照和陰 性對照（自含式生物指示物不用設陰性對照）。
滅菌非管腔器械時(shí)，應使用非管腔生物監測包進(jìn)行監測，應將生物指示物置于紙塑包裝袋內，密封 式包裝后，放置于滅菌器內最難滅菌的部位(按照生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)建議，遠離甲醛注人口）。滅菌周期完 成后立即將非管腔生物監測包從滅菌器中取出，生物指示物應放置56C±2C培養7d(或遵循產(chǎn)品說(shuō) 明書(shū)），觀(guān)察培養結果。并設陽(yáng)性對照和陰性對照（自含式生物指示物不用設陰性對照）。
E.4結果判定
陽(yáng)性對照組培養陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，實(shí)驗組培養陰性，判定為滅菌合格。陽(yáng)性對照組培養 陽(yáng)性，陰性對照組培養陰性，實(shí)驗組培養陽(yáng)性，判定為滅菌失??；同時(shí)應進(jìn)一步鑒定實(shí)驗組陽(yáng)性的細菌是 否為指示菌或是污染所致。
